重组单链Fv段融合TNFα(mscFv25-TNFα)的导向治疗

目的希望能得到具有临床应用价值的抗肝癌重组单链Fv段-免疫毒素。方法将抗肝癌重组单链Fv段-免疫毒素(mscFv25-TNFα)在大肠杆菌JM109中以IPTG诱导进行表达。将包涵体形式的表达产物溶解和折叠后，以GST亲合层析色谱纯化。用间接免疫荧光染色测定纯化后目的蛋白的活性，MTT试验鉴定mscFv25-TNFα对靶细胞 SMMC-7721的杀伤活性。通过对荷肝癌(SMMC-7721)裸鼠进行体内初步抑瘤实验，检测mscFv25-TNFα的导向治疗的效果。结果纯化的目的蛋白间接免疫荧光染色呈阳性。MTT实验提示，在放线菌素D存在的情况下，体外mscFv25-TNFα对靶细胞SMMC-7721具有细胞毒作用。实验组14只裸鼠中4只的移植瘤的生长完全得到抑制，而TNFα对照组无完缓解。结论间接免疫荧光染色表明，mscFv25-TNFα的特异性和亲和力与亲本抗体HAb25相比较没有明显下降。荷肝癌裸鼠体内的抑瘤实验显示，mscFv25-TNFα对荷肝癌裸鼠体内直径2～4mm左右的肿瘤具有一定的杀伤作用，初步证明mscFv25-TNFα具有一定的临床应用潜力。