ESTANDARIZACIÓN DE LA TÉCNICA RT-PCR TIEMPO REAL PARA LA DETECCIÓN DEL VIRUS DE LA NECROSIS PANCREÁTICA INFECCIOSA (VNPI) EN TRUCHAS ARCO IRIS (Oncorhynchus mykiss).

El objetivo del presente estudio fue estandarizar y validar la tecnica de RT-PCR tiempo real para el diagnostico del virus de Necrosis Pancreatica Infecciosa (VNPI) en truchas arco iris ( Oncorhynchus mykiss ) de la sierra central del Peru. Se colectaron mues- tras de rinon y bazo de truchas con aparentes signos clinicos de necrosis pancreatica infecciosa (NPI) (n= 61) y truchas aparentemente sanas (n= 60) de dos piscigranjas del valle del Mantaro, Junin. Previo a la estandarizacion, las muestras fueron procesadas para la deteccion de antigeno del VNPI por inmunofluorescencia indirecta (IFI). Diez muestras de rinon y bazo de truchas negativas al VNPI por IFI fueron inoculados con una cepa del VNPI con titulo de 10 3 UFP/ml. La extraccion del acido nucleico del VNPI de las 121 muestras de rinon y bazo y de las 10 muestras de rinon y bazo inoculadas con el VNPI, la sintesis del ADN complementario y la RT-PCR tiempo real se realizaron utilizando kits comerciales. Se usaron los cebadores WB1 y WB2 correspondientes a un segmento del gen que codifica la proteina VP2 de los Aquabirnavirus. Una cepa del VNPI fue utilizada como control positivo y cepa de Rotavirus A, virus de Gumboro, virus de diarrea viral bovina, parainfluenza 3 como controles negativos. Las 121 muestras de rinon y bazo de las truchas arco iris resultaron negativas al VNPI por IFI. Los resultados de la RT-PCR en tiempo real fueron determinados en funcion a los valores del ciclo de amplificacion que fue de 31.7 y temperatura de disociacion de 80.4 °C de los productos del virus control positivo. La tecnica de RT-PCR en tiempo real fue capaz de detectar hasta una concentra- cion de 10 2 DI 50 UFP/ml del VNPI en las muestras de rinon y bazo inoculadas, mientras que las 121 muestras de truchas resultaron negativas al VNPI. La tecnica de RT-PCR en tiempo real tuvo 100% de sensibilidad y especificidad en la deteccion del virus de