感染期子宫颈癌U14细胞荷瘤小鼠巨噬细胞分泌CCL5受到抑制的机制
Zhonghua fu chan ke za zhi(2015)
Abstract
目的:探讨感染期子宫颈癌U14细胞荷瘤小鼠巨噬细胞分泌CC型趋化因子配体5(CCL5)受到抑制的机制。方法取6~8周龄的雌性C57BL/6小鼠随机(采用随机数字表法)分为4组,每组6只。无瘤组:皮下注射DMEM培养基;荷瘤组:皮下注射子宫颈癌细胞系U14细胞;无瘤+脂多糖(LPS;用于诱导小鼠感染)组:皮下注射DMEM培养基,腹腔内注射LPS;荷瘤+LPS组:皮下注射U14细胞,腹腔内注射LPS。(1)采用ELISA法及荧光定量PCR技术检测各组小鼠血清及巨噬细胞中CCL5和前列腺素E2(PGE2)的表达。(2)提取各组荷瘤小鼠血清制备肿瘤条件培养基(TCM),体外诱导巨噬细胞,检测诱导前、后各组上清液和巨噬细胞中CCL5、PGE2和环磷酸腺苷(cAMP)的表达。(3)荷瘤+LPS组选用环氧合酶2(COX-2)抑制剂——NS398阻断PGE2的产生(即荷瘤+LPS+NS398组),蛋白激酶A(PKA)阻滞剂——H89阻断cAMP/PKA信号通路(即荷瘤+LPS+H89组),分别制备TCM并检测两组上清液和巨噬细胞中CCL5、PGE2和cAMP的表达。结果(1)荷瘤组小鼠血清中CCL5蛋白含量及巨噬细胞中CCL5 mRNA的表达水平[分别为(151±35)pg/ml、1.0]均明显低于无瘤组[分别为(691±85)pg/ml、4.5±0.8;P<0.05];其血清中PGE2蛋白含量及巨噬细胞中PGE2 mRNA的表达水平[分别为(1198±83)pg/ml、5.8±0.8]均明显高于无瘤组[分别为(187±25)pg/ml、1.0;P<0.05]。无瘤+LPS组小鼠血清中CCL5蛋白含量及巨噬细胞中CCL5 mRNA的表达水平[分别为(4049±141)pg/ml、31.5±2.0]均高于明显高于荷瘤+LPS组[分别为(1951±71)pg/ml、12.1±2.8;P<0.05];其血清中PGE2蛋白含量及巨噬细胞中PGE2 mRNA的表达水平[分别为(676±70)pg/ml、3.4±0.4]均低于荷瘤+LPS组[分别为(2550±382)pg/ml、11.6±0.9;P<0.05]。(2)各组小鼠血清制备的TCM在体外培养巨噬细胞后,荷瘤组上清液中CCL5、PGE2、cAMP蛋白含量[分别为(1626±177)、(790±156)、(164±30)pg/ml]及巨噬细胞中CCL5、PGE2、cAMP mRNA的表达水平(分别为28.6±1.2、1.7±0.3、1.6±0.3)均明显高于无瘤组[其蛋白含量分别为(27±3)、(448±115)、(118±25)pg/ml,其mRNA的表达水平均为1.0;P<0.05]。无瘤+LPS组上清液中CCL5蛋白含量及巨噬细胞中CCL5 mRNA的表达水平[分别为(10475±742)pg/ml、212.0±5.7]均明显高于荷瘤+LPS组[分别为(6375±530)pg/ml、142.3±2.5;P<0.05];无瘤+LPS组上清液中PGE2、cAMP蛋白含量[分别为(2438±95)、(340±13)pg/ml]及巨噬细胞中PGE2、cAMP mRNA的表达水平(分别为4.3±0.7、4.1±0.4)均明显低于荷瘤+LPS组[其蛋白含量分别为(3441±163)、(542±42)pg/ml,其mRNA的表达水分别为5.9±0.3、5.4±0.5;P<0.05]。(3)与荷瘤+LPS组比较,荷瘤+LPS+NS398组上清液中CCL5蛋白含量及巨噬细胞中CCL5 mRNA的表达水平[分别为(7691±269)pg/ml、159.0±8.9]明显升高(P<0.05),而上清液中PGE2、cAMP蛋白含量及巨噬细胞中PGE2、cAMP mRNA的表达水平均明显降低(P<0.05);荷瘤+LPS+H89组上清液中CCL5蛋白含量及巨噬细胞中CCL5 mRNA的表达水平[分别为(8375±520)pg/ml、177.0±8.8]进一步升高(P<0.05),而上清液中PGE2、cAMP蛋白含量及巨噬细胞中PGE2、cAMP mRNA的表达水平均进一步降低(P<0.05)。结论感染期子宫颈癌U14细胞荷瘤小鼠血清可在体外抑制巨噬细胞分泌CCL5,这种抑制效应可能是通过cAMP/PKA通路而受PGE2的调控。
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Uterine cervical neoplasms,Chemokine CCL5,Cyclic AMP,Cyclic AMP-dependent protein kinases,Dinoprostone,Cyclooxygenase 2,Neoplasms,experimental
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