鸡 PD 1胞外区基因的克隆表达及其蛋白生物学活性鉴定

为研究鸡程序性细胞死亡因子1（PD 1）胞外区的生物学活性，根据 GenBank 中的鸡 PD 1基因序列，经生物信息学比对分析，设计鸡 PD 1胞外区特异性克隆引物，扩增目的基因，连接原核表达载体 pET 28a（＋），构建重组表达载体 pET 28a PD 1，转化至 Rosetta（DE3）大肠杆菌，并对IPTG 浓度、诱导温度、诱导时间进行优化，对表达产物进行 SDS PAGE 和 Western blot 分析，应用流式细胞术对所获得重组蛋白的生物学活性进行鉴定。结果显示，成功克隆了鸡 PD 1胞外区基因；SDS PAGE 和 Western blot 分析结果表明，37℃、0．1 mmol/L IPTG 诱导4 h 时，PD 1胞外区融合蛋白表达量最高，以包涵体形式存在；流式细胞术分析结果表明，PD 1胞外区重组蛋白具有一定的生物学活性。