含变形链球菌PAcA基因的真核表达质粒pcDNA3.1-PAcA的构建与鉴定

目的:构建含有免疫刺激序列、可防止变形链球菌在牙面粘附的DNA疫苗.方法:利用PCR技术由质粒pPAcA-CTA2B扩增编码PAcA的DNA片段;通过T-A克隆技术将目的DNA片段克隆于载体pMD18-T,鉴定插入方向后,将目的DNA从载体上释放,再克隆于含有CpG免疫刺激序列的真核表达载体pcDNA3.1,构建出用作防龋疫苗的真核表达质粒pcDNA3.1-PAcA.结果:通过对重组质粒pcDNA3.1-PAcA进行酶切图谱和DNA序列测定分析,证明真核表达重组质粒pcDNA3.1-PAcA构建成功、阅读框架正确.结论:利用T-A克隆等技术可成功将编码PAcA的DNA片段克隆到含有免疫刺激序列CpG的真核表达载体pcDNA3.1,构建出真核表达重组质粒pcDNA3.1-PAcA.