PEI增强G250 DNA疫苗和重组肽疫苗的prime-boost免疫策略研究

目的:探讨PEI作为免疫佐剂对G250抗原肽基因PVAX1/C-G250肽-C免疫保护效果的增强作用及联合应用CAIX蛋白疫苗进行PRIME-BOOST免疫程序免疫增强效果.方法:用EcoR l、Xhol和EcoRI、Sall分别双酶切PVAX1及既往构建的pET28a (+)/C-G250肽-C质粒.利用DNA重组技术构建重组质粒PVAX1/C-G250肽-C,酶切分析鉴定.大量提取质粒并分光光度计测质粒含量.将32只雌性昆明小鼠随机分为(A)裸DNA组,(B)DNA-PEI复合物组,(C)DNA-PEI+蛋白疫苗组,(D)空白对照组.按O、1 0、20、30天程序经股四头肌注射免疫.C组在第20天及第30天进行蛋白冲击.初次免疫前和第40天鼠尾取血,ELISA法检测抗体滴度.流式细胞术测淋巴细胞亚群CD4+和CD8+.结果:酶切及基因测序鉴定证实G250抗原肽cDNA正确插入PVAX1/C-G250肽-C真核表达的重组质粒中.昆明小鼠经4次免疫后,3个实验组都产生了特异性的体液和细胞免疫反应,B组的抗体滴度1:1.28×104及CD4+、CD8+达26.12％和12.60％,明显高于A组的1:3.2×103和CD4+,CD8+占到19.32％和10.74％.而蛋白冲击组的1:5.12×104和CD4+,CD8+占到41.96％和15.14％,明显高于B组(P＞0.05).结论:成功构建重组质粒PVAX1/C-G250肽-C.该DNA疫苗与PEI和G250蛋白疫苗联合使用后产生极强的免疫原性,诱导产生了高滴度、高特异性抗体及细胞免疫反应.证实G250DNA疫苗联合PEI使用并进行蛋白疫苗冲击的免疫策略可产生强大的免疫保护作用.为恶性肿瘤的术后辅助治疗提供新的思路和方法.