线粒体DNA缺失HepG2细胞系的建立、鉴定及放射生物学特性

目的：为研究人肝癌细胞系HepG2线粒体DNA（mtDNA）缺失后的放射生物学特性，建立并鉴定mtDNA缺失HepG2（ρ0HepG2）细胞系。测定辐射干预下mtDNA缺失（Rho0）肝癌细胞的凋亡情况、侵袭能力以及辐射敏感性的变化。方法在含有溴化乙锭（EB）、丙酮酸、尿嘧啶的特殊培养基中培养HepG2细胞，经30次传代后，有限稀释法筛选完全去除mtDNA的克隆。去除丙酮酸及尿嘧啶后，观察细胞的存活情况。PCR法鉴定mtDNA的缺失。用6MvX射线梯度剂量照射HepG2细胞和ρ0HepG2细胞，平板克隆法绘制生长曲线，线性二次方程拟合生存曲线，计算α/β。2Gy剂量辐射细胞，24 h后用Hochest33342细胞核染色，比较HepG2细胞与ρ0HepG2凋亡率的差异。用Transwell法测定两种不同细胞的侵袭能力。结果在含EB特殊培养环境下，HepG2细胞可持续生长传代至30代，去除丙酮酸和尿嘧啶后，细胞短时间内大量死亡。经PCR法证实mtDNA完全缺失。ρ0HepG2细胞α/β显著低于正常HepG2细胞，辐射抵抗能力增强。辐射干预后ρ0HepG2的凋亡比例显著减少。ρ0HepG2穿膜细胞数显著增多。结论在EB长期诱导下，HepG2肝癌细胞可被成功诱导为mtDNA缺失细胞。ρ0HepG2细胞的辐射抵抗性显著增强，抗凋亡能力及侵袭能力均提高。