膜泡运输蛋白VdSec22参与大丽轮枝菌胞外蛋白的分泌和致病性

[目的]验证大丽轮枝菌分泌途径中一个膜泡运输蛋白VdSec22的功能,为防治棉花黄萎病提供潜在的生物靶点.[方法]利用“正负双向筛选法”的方法,构建大丽轮枝菌VdSec22蛋白编码基因缺失的突变体菌株△QF.通过农杆菌介导的转化,将其编码基因VdSec22重新导入△QF构建了功能回补菌株C△QF.以野生型菌株为对照,检测上述菌株分泌胞外蛋白(果胶酶、纤维素酶和毒素蛋白)的能力;采用蘸根接种的方法,检测上述菌株对棉花致病性的差异.同时通过定量PCR检测内质网分子伴侣表达量的方法,推断突变体菌株△QF中是否发生了内质网应激反应.[结果]成功构建了基因敲除突变体△QF和功能回补菌株C△QF.突变体菌株△QF的果胶酶、纤维素酶、毒素蛋白的分泌能力和对棉花的致病性均较野生型减弱,并且产生了内质网应激反应.重新导入VdSec22基因可弥补突变体菌株△QF的上述缺陷.[结论]VdSec22是大丽轮枝菌的一个重要分泌途径蛋白,在大丽轮枝菌诸多胞外致病蛋白的分泌和棉花致病性中起重要作用.VdSec22可作为防治棉花黄萎病的潜在生物靶点.