日本血吸虫新基因Sj79的分子特征及RNA干扰效应

目的：研究日本血吸虫新基因Sj79的结构特征及特点，并进行RNA干扰以观察其RNAi效应，为进一步研究其在抗血吸虫生殖发育中的作用及机制提供依据。方法利用NCBI数据库中已公开的日本血吸虫EST序列信息对Sj79的分子结构特征进行分析，并对不同虫期和性别血吸虫的Sj79的mRNA表达水平进行分析，对雌虫进行Sj79的siRNA浸泡干扰，干扰后采用定量PCR检测Sj79转录本相对表达水平变化。结果 Sj79蛋白的开放阅读框含有696对碱基，由一个外显子构成。该基因具有明显的期特异性，在雌虫中转录水平较高。siRNA片段浸泡3 d后，低剂量（20 nmol/L）siRNA?1组Sj79转录本的表达水平[（41.0±12.3）%]低于siRNA?NC组[（103.2±14.4）%]，差异有统计学意义（t =3.28，P<0.05）；高剂量（200 nmol/L）siRNA?1组[（15.8±10.9）%]、siRNA?2组[（11.1±8.8）%]虫体Sj79转录本的相对表达水平均低于siRNA?NC组[（100.1±6.3）%]，差异均有统计学意义（t=13.44、27.84，P均<0.01），前二者对Sj79转录本的转录抑制率可达84.2%、88.9%。siRNA片段浸泡7 d后，仅低剂量siRNA?1[（43.4±4.5）%]、siRNA?2[（62.5±5.4）%]干扰后虫体Sj79转录本的相对表达水平低于siRNA?NC组[（100.4±5.2）%]（t=8.33、5.07，P均<0.01）。结论本研究完善了Sj79基因的mRNA序列和基因组信息，了解了其结构特征，并用siRNA干扰法筛选到了有效的siRNA?1和siRNA?2片段，有利于后续观察Sj79分子干扰对体外雌虫产卵的影响。