雌二醇经丝苏氨酸蛋白激酶激活核因子κB通路对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖迁移的影响

目的 探讨雌二醇在子宫内膜癌Ishikawa细胞中是否通过丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)介导核因子κB (NF-κB)通路产生细胞因子,及其对细胞增殖及迁移的影响.方法 Western blot法检测雌二醇作用Ishikawa细胞后AKT活化情况,以及AKT和ER抑制剂对雌二醇活化AKT的影响,TransAM NF-κB p65检测不同浓度雌二醇及1×10-6 mol/L雌二醇作用不同时间后的NF-κB活性水平.经雌二醇(雌二醇组)、ER抑制剂(ER组)、AKT抑制剂(AKT组)和NF-κB抑制剂(NF-κB组)分别预处理Ishikawa细胞后,采用荧光定量PCR检测细胞内血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) mRNA表达,Western blot法检测VEGF、bFGF蛋白的变化,流式细胞仪检测细胞周期的变化,羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)法检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞迁移能力.结果 Western blot检测结果显示,雌二醇、AKT和ER抑制剂作用Ishikawa细胞后AKT活性水平分别为0.090±0.075、0.013 ±0.036、0.042±0.008,对照组为0.053±0.036;雌二醇组的AKT活性值比对照组、ER组及AKT组升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).TransAM检测显示,雌二醇浓度为1×10-6mol/L时,Ishikawa细胞NF-κB活性为0.77±0.20,较对照组(0.51±0.16)明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);1×10-6mol/L雌二醇作用30 min及1h时,Ishikawa细胞NF-κB活性水平最高(P＜0.05).AKT组NF-κB活性为0.54±0.27,低于1×10-6mol/L雌二醇组(P＜0.05).雌二醇组VEGF、bFGF mRNA的表达分别为6.34±0.45和1.58 ±0.12,明显高于对照组的0.83±0.03和0.34±0.02(均P＜0.01);雌二醇组VEGF、bFGF蛋白的表达均明显高于对照组、ER组、AKT组和NF-κB组(均P＜0.05).雌二醇作用Ishikawa细胞后,细胞增殖数明显增多,G0/G1期比例明显低于对照组(均P＜0.01).结论 雌二醇可能经AKT激活NF-κB通路产生VEGF和bFG因子,促进Ishikawa细胞的增殖与迁移能力.