人源性抗前列腺特异性膜抗原单链抗体的基因构建、表达及鉴定

目的:分别构建人源性抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)单链抗体(scFv)/鱼精蛋白截短体(tp)、scFv/弗林蛋白酶识别位点(Fdt)/流感病毒融合肽结构域(HA2)/tp融合蛋白基因.利用原核表达体系表达、纯化并检测scFv、scFv-tp、scFv-Fdt-HA2-tp融合蛋白的活性.方法:采用PCR的方法,扩增融合基因scFv、scFv-tp、scFv-Fdt-HA2-tp,将获得的基因克隆入原核表达载体pET28,在大肠杆菌BL21中表达,表达产物经SDS-PAGE和Western印迹鉴定,通过Ni2+-NTA螫合层析纯化.ELISA分析融合蛋白抗原亲和活性.结果:成功构建了人源性抗PSMA融合基因,经IPTG诱导后在M15中以包涵体形式表达.表达的目的蛋白均能与PSMA抗原结合.结论:融合蛋白具有结合抗原的活性,为靶向递送siRNA的研究奠定了基础.