EMA-PCR方法快速检测铜绿假单胞菌活菌研究

目的 探讨将叠氮溴乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)选择渗透性与PCR技术相结合(EMA-PCR),建立有效快速检测铜绿假单胞菌活菌的方法.方法 以铜绿假单胞菌oprI基因为PCR检测靶基因,纯培养物提取模板进行PCR,检测PCR灵敏度、EMA使用浓度和曝光时间优化试验.结果 PCR检测灵敏度为3×103 CFU/mL;曝光处理时间为10 min; EMA浓度≤5μg/mL对活菌DNA扩增没有明显抑制,终浓度为1 μg/mL EMA能有效抑制3×106 CFU/mL死菌扩增;1％活菌混合体系检测结果阳性.结论 EMA-PCR方法能有效快速检测铜绿假单胞菌活菌,能避免PCR检测可能造成的假阳性结果.