含EB病毒核抗原1重组腺病毒的构建及其在小鼠中免疫效果研究

构建含EB病毒核抗原1(ebna1)重组腺病毒疫苗防治鼻咽癌,并为鼻咽癌疫苗的研究提供药效学资料.PCR法扩增B95-8细胞株中ebna1的C-端部分片段,EcoRⅠ和BglⅡ酶切后插入pDC316穿梭质粒,ebna1片段测序比对正确后,与腺病毒骨架质粒pBHG共转染293细胞.收集病变后细胞,通过流式细胞仪和Western blot检测EB-NA1在293细胞中的表达.电镜下观察所获得的病毒颗粒大小,TCID50法确定重组腺病毒滴度.以2×108 VP/只的rAd-ebna1免疫BALB/c小鼠.在免疫结束后的第1、2、4和8周检测小鼠体内EBNA1特异性细胞免疫应答的水平变化.结果显示,经PCR扩增获得约900 bp ebna1目的片段,测序结果与标准株序列一致,质粒共转染293细胞后,细胞出现病变,获得含EB病毒核抗原1重组腺病毒(rAd-ebna1),流式细胞仪和Western blot检测结果证实,ebna1在细胞中正确转录表达,收获病毒二代滴度可达108 TCID50/mL.rAd-ebna1免疫小鼠后,能够激活EBNA1的CD4+T细胞特异性细胞免疫应答.本实验成功构建了含ebna1片段的重组腺病毒,并具激活CD4+T细胞免疫应答活性.