Annexin A5基因沉默对Hep-2细胞凋亡的影响

目的 探索annexinA5基因及其表达沉默后对人喉癌Hep-2细胞凋亡的影响.方法 培养人喉癌细胞Hep-2,经Lip2000转染特异siRNA片段沉默annexin A5基因;TRlzol法提取细胞总RNA;RT-PCR法检测annexinA5在mRNA水平的表达是否降低;Western blot法检测annexin A5的蛋白表达是否下降;经流式细胞仪AnnexinV-FITC法检测annexin A5基因沉默后的人喉癌Hep-2细胞的凋亡情况.采用SPSS 13.0软件对数据进行单因素方差分析.结果 特异siRNA片段成功转入Hep-2细胞;RT-PCR结果显示实验siRNA组、阴性siRNA组、脂质体组及空白细胞组的相对灰度值为0.70±0.03、1.18±0.05、1.17±0.06及1.23±0.07;经统计学分析表明实验组annexin A5在mRNA水平的灰度明显弱于阴性siRNA组(t=-14.77)、脂质体组(t=-13.23)及空白细胞组(t=-12.99),P值均＜0.05;Western blot结果显示实验siRNA组、阴性siRNA组、脂质体组及空白细胞组的相对灰度值为1.21±0.03、3.88±0.06、3.87±0.02及3.95±0.08;统计学分析表明annexin A5的蛋白的相对灰度值明显弱于阴性siRNA组(t=-70.34)、脂质体组(t=-150.62)及空白细胞组(t=-56.32),P值均＜0.05;AnnexinV-FITC法结果当annexin A5基因沉默后,人喉癌细胞Hep-2凋亡率实验siRNA组、阴性siRNA组、脂质体组及空白细胞组分别为4.43％±0.12％、13.67％±0.22％、13.66％±0.12％及13.35％±0.13％,实验组细胞凋亡率较阴性siRNA组(t=-62.50)、脂质体组(t=-14.16)及空白细胞组(t=-11.47)明显降低,P值均＜0.05.结论 在人喉癌Hep-2细胞中,annexin A5可能促进凋亡,有可能成为喉癌诊断、治疗及预后的新的生物靶标.