蓝莓花青素通过下调p53基因DNA甲基化抑制口腔癌KB细胞增殖及诱导细胞凋亡

文章从内蒙古野生蓝莓(Vaccinium uliginosum Lim)中提取花青素,观察其对口腔癌细胞株KB的增殖及凋亡的作用,探讨其作用机制与p53基因甲基化的相关性。利用含0.1%盐酸的甲醇提取花青素,用高效液相色谱-质谱(High performance liquid chromatography-mass spectrometry, HPLC-MS )鉴定花青素的成分。利用四甲基偶氮唑蓝(Methylthiazolyl-tetrazolium, MTT)比色法、流式细胞术、免疫荧光法、免疫细胞化学法和Western blot法分析蓝莓花青素对 KB 细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和 p53蛋白表达的影响；利用甲基化特异性 PCR 法(Methylation-specific PCR, MSP)分析蓝莓花青素诱导细胞凋亡与p53基因甲基化的关系。结果显示,内蒙古自治区的野生蓝莓中至少存在14种花青素成分；蓝莓花青素呈剂量依赖的方式抑制KB细胞增殖,诱导细胞周期阻滞在 G2/M 期,而且能诱导细胞凋亡；蓝莓花青素处理后 Caspase-9蛋白和细胞色素 C 的表达明显增加；Western blot结果表明蓝莓花青素可以诱导KB细胞中p53蛋白表达上调；MSP结果表明随蓝莓花青素浓度增加,未甲基化的p53的比例增加,说明p53的甲基化状态有所下调。