二甲基精氨酸二甲胺水解酶2基因启动子区一个NF-κB反应元件的鉴定

目的 鉴定二甲基精氨酸二甲胺水解酶2 (DDAH2)基因启动子区的一个NF-κB反应元件,证明其在DDAH2转录激活中的作用.方法 应用多种软件分析DDAH2启动子区,寻找潜在的转录因子结合位点;构建系列截短的DDAH2基因启动子荧光素酶报告基因载体,转染人胚肾HEK293细胞,通过荧光素酶活性检测分析各段启动子的活性;应用电泳泳动迁移实验(electrophoresis mobility shift assay,EMSA)和染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)方法分别在体外及体内鉴定NF-κB反应元件;构建NF-κB位点突变的DDAH2基因启动子荧光素酶报告基因载体,转染细胞,比较其与野生型启动子活性差异.结果 DDAH2基因启动子区存在多种潜在的转录因子结合位点;DDAH2的各段启动子具有高转录活性,其中-530～-437区域为一个正调控区域;DDAH2基因启动子-476～-469区为NF-κB反应元件,NF-κB可特异性结合于该位点;该NF-κB元件突变使DDAH2基因启动子活性显著下降.结论 DDAH2基因启动子-476～-469区为NF-κB反应元件,该元件在DDAH2转录激活中具有重要的作用.