过表达Wnt3基因抑制肝前体细胞凋亡

目的：利用腺病毒载体转染体外培养的肝前体细胞，研究过表达Wnt3对肝前体细胞凋亡的影响。方法用携带Wnt3的腺病毒载体（Ad-Wnt3）转染肝前体细胞，同时设立空载体腺病毒转染组（Ad-GFP）为对照。转染72 h后，用荧光显微镜观察Hoechst33342染色后细胞凋亡情况；流式细胞术检测Annexin-PE/7-ADD法标记的细胞凋亡率；RT-PCR和Western blot分别检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Bcl-xl的mRNA及蛋白表达水平。结果 qRT-PCR和Western blot结果显示，Wnt3在肝前体细胞中特异性表达，表明腺病毒系统Ad-Wnt3能高效转染肝前体细胞。与对照组相比较，肝前体细胞转染Wnt3后，肝前体细胞的凋亡水平明显下降，凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-xl的mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。Bax的mRNA及蛋白表达水平则明显下降（P<0.05）。结论在肝前体细胞中，Wnt3基因过表达能抑制肝前体细胞凋亡，其机制可能是通过Bcl-2家族起作用。