甲型流感病毒逆转录环介导等温扩增快速检测方法的建立

目的 采用逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)技术建立了一种针对甲型流感病毒的特异、灵敏、快速、可视、简便的检测方法.方法 根据甲型流感病毒M基因的保守序列,利用PrimerExplorerV4软件,设计了一套针对M基因的8个区域的5条特异性引物,优化了反应体系与扩增条件,并验证其特异性与灵敏性.结果 该方法能检测出H1、H3、H5、H6、H7、H9亚型流感病毒,而对乙型流感病毒、人副流感病毒、呼吸道合胞病毒、人冠状病毒、人偏肺病毒、人腺病毒、人博卡病毒均无扩增反应,其最低检测限度为50拷贝/μl.另外,扩增反应只需要40 min就能判读结果,并可通过反应液是否有沉淀或向反应液中加入荧光染料来对结果进行可视化诊断.结论 本研究建立的RT-LAMP检测方法具有高特异性、灵敏度、快速简便、可视化判读结果等优势,适合在基层进行甲型流感病毒的快速检测,并可以应用于大流感疫情的准确筛查.