下调脐静脉内皮细胞小窝蛋白1表达对RPMI 8226细胞硼替佐米敏感性的影响
Zhonghua xue ye xue za zhi = Zhonghua xueyexue zazhi(2013)
Abstract
目的 探讨下调脐静脉内皮细胞(HUVEC)小窝蛋白1(Cav-1)表达对多发性骨髓瘤细胞硼替佐米敏感性的影响.方法 构建靶向Cav-1基因的shRNA表达载体及阴性对照shRNA表达载体,转染HUVEC细胞株;以多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226为对象,用MTT法检测不同浓度硼替佐米单独或联合50 nmol/L地塞米松对单独培养及与HUVEC(转染干扰质粒或对照质粒)间接共培养的RPMI8226细胞增殖的抑制作用;用Western blot法检测Cav-1表达水平;用流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡率及活性氧(ROS)水平变化. 结果 Cav-1 shRNA-1转染的HUVEC (HUVECCav-1 low) Cav-1蛋白表达水平与转染阴性对照载体组相比显著降低,其Cav-1蛋白相对表达水平为0.2199±0.0288对1.3195±0.2393(P<0.01);RPMI8226细胞单独培养及与HUVEC、HUVECCav-1 low共培养,硼替佐米作用的IC50值分别为20、50、65 nmol/L.HUVEC、HUVECCav-1 low可使RPMI8226细胞周期阻滞,RPMI8226细胞单独培养及与HUVEC、HUVECCav-1 low共培养后RPMI8226细胞G0/G1期比例分别为28.5%、30.4%和36.2%;HUVEC保护RPMI8226细胞免于凋亡,20 nmol/L硼替佐米作用于单独培养及与HUVEC、HUVECCav-1 low共培养的RPMI8226细胞24 h后,其细胞凋亡和(或)死亡率分别为66.8%、10.7%和8.6%;RPMI8226细胞可诱导HUVEC的氧化应激,共培养前后RPMI8226细胞ROS水平由15.0%上升至35.2%,HUVEC的ROS水平由80.4%上升至91.0%,HUVECCav-1 lowROS水平由84.6%上升至96.8%.结论 下调HUVEC Cav-1表达可促进共培养的RPMI8226细胞增殖,抑制细胞凋亡,使其阻滞在静息期,并降低RPMI8226对硼替佐米的敏感性.
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rpim8226 cells,bortezomib,co-cultured,down-regulated
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