H1N1亚型流感病毒NA基因在昆虫杆状病毒系统中的表达及鉴定

目的 构建含有H1N1亚型流感病毒NA基因的重组杆状病毒.方法 用PCR方法扩增甲型H1N1亚型流感病毒(A/PR8/34)全长神经氨酸酶基因,并将其连接于pFastBacdual载体,构建杆状病毒转移载体pFBD-NA.转化含有Bacmid的DH10B感受态细胞后,获得重组穿梭载体rBacmid-NA.将其转染昆虫细胞sf9,获得重组病毒rBac-NA.提取重组杆状病毒rBac-NA的DNA并使用PCR方法检测；采用间接免疫荧光,SDS-PAGE,Western Blot鉴定以及ELISA方法检测所表达的NA蛋白.结果 经PCR鉴定所构建质粒rBacmid-NA正确；使用间接免疫荧光检测可见特异性绿色荧光位于感染细胞的表面,Western Bolt检测可与小鼠抗PR8株多克隆抗体和兔抗甲型流感病毒NA多克隆抗体发生特异性免疫反应；经ELISA检测,NA蛋白可被鼠抗流感病毒(PR8)多克隆抗体特异性识别.结论 上述结果证明,我们获得了表达流感病毒NA蛋白的重组杆状病毒,为进一步研究NA蛋白的功能和新型流感疫苗的开发奠定了基础.