自噬调节剂对莱菔硫烷诱导Caco-2细胞自噬效应及UGT1A1表达的影响

目的 观察以人结肠腺癌细胞Caco-2为模型,探讨3-甲基腺嘌呤(3-MA)及雷帕霉素(Rapa)对莱菔硫烷(SFN)诱导细胞自噬及葡萄糖醛酸转移酶1A1 (UGT1A1)的影响.方法 采用Western印迹法测定微管相关蛋白1轻链3(LC3)和UGT1A1,采用免疫荧光法观察LC3的胞内分布及核因子E2 P45相关因子2(Nrf2)的核内转位,实时荧光定量PCR法测定UGT1A1、人孕烷X受体(hPXR)的mRNA表达.结果 SFN对LC3-Ⅱ蛋白的诱导呈浓度和时间依赖性,3-MA及Rapa可分别减弱或增强LC3-Ⅱ蛋白的表达；与对照组相比,Rapa、SFN及SFN+Rapa可诱导UGT1A1 mRNA的表达增强(分别为对照组的2.4倍、4.12倍、2.41倍,均P＜0.01),且诱导UGT1A1蛋白的表达增强；对照组未见明显的Nrf2核内荧光标记,而含有SFN的处理组中可见强烈的Nrf2核内荧光标记,且SFN+Rapa更为明显；与对照组相比,Rapa及SFN+Rapa的hPXR mRNA表达增强(分别为对照组的1.82倍、1.4倍,均P＜0.01).结论 3-MA和Rapa可分别减弱或增强SFN对Caco-2细胞自噬效应的诱导；Rapa可进一步增强SFN对UGT1A1的诱导；Rapa联合SFN可能通过同时激活Nrf2和hPXR增强了对UGT1A1的诱导.