Epstein-Barr病毒A73基因在鼻咽癌组织中的表达及其细胞内定位研究

背景与目的: A73基因是 EB病毒 (Epstein- Barr virus,EBV) BamHⅠ A区右向转录物家族( BamHⅠ A rightward transcripts,BARTs)的主要成员,该家族基因转录表达于多种 EB病毒相关细胞和肿瘤.本研究旨在了解 A73基因在广东地区鼻咽癌病例中的表达特点,克隆该基因并明确其在上皮细胞中表达的亚细胞区域.方法:收集鼻咽癌组织、鼻咽非癌组织和鼻咽癌外周血淋巴细胞,常规培养 SUNE1、B95.8、Raji和 BJAB等细胞株,分别提取各样品的 DNA和总 RNA,以巢式 PCR扩增 W序列来检测 EB病毒的感染, RT- PCR检测 A73基因在各组织、细胞株中的表达, 克隆测序后定向亚克隆入 pEGFP- C2绿色荧光蛋白( green fluorescence protein, GFP)表达载体,通过脂质体转染技术将其转入人胚肾上皮( human embryo kidney 293, HEK293)细胞, RT- PCR检测 A73 mRNA的表达,并通过激光共聚焦显微镜观察融合蛋白表达的亚细胞区域.结果:除 BJAB细胞株外,所有标本中均检测到 EB病毒 W序列; A73 mRNA在鼻咽癌组织中的表达率为 79 63%( 43/54),在鼻咽非癌组织中则仅为 4%( 1/25),两者差异有显著性( P< 0 001);鼻咽癌外周血淋巴细胞中未检测到 A73表达, SUNE1细胞中 A73的表达高于 B95.8和 Raji细胞.所构建的 A73重组质粒可稳定表达于 HEK293细胞,其编码蛋白的表达以胞浆为主.结论: EB病毒 A73基因在鼻咽癌组织中存在广泛转录,其编码蛋白在体外可稳定表达于上皮细胞的胞浆,表明 A73与鼻咽癌的发生、发展密切相关,并可能作为信号分子参与上皮癌变过程的信息传递.