抗前列腺癌/抗CD3双特异性单链抗体的构建及表达

目的构建并表达抗前列腺癌/抗人CD 3双特异性单链抗体,观察其生物学活性及临床意义.方法利用PCR方法及分子生物学基因克隆技术,构建抗前列腺癌/抗人CD 3双特异性单链抗体融合基因,测序正确后,利用EcoR I 和Hind Ⅲ酶切位点,将融合基因亚克隆入真核表达载体进行表达,表达产物纯化后,利用流式细胞仪进行生物学活性测定.结果经酶切、测序分析证实插入的基因片段大小为1.5 kb,序列与设计完全一致;SDS-PAGE和Western印迹实验证明:表达产物分泌于细胞培养上清,相对分子质量为61 000;流式细胞仪结果显示:双特异性单链抗体与PBMC和PC-3细胞的阳性结合率分别为54.1%和53.7%.结论抗前列腺癌/抗人CD 3双特异性单链抗体具有较好的生物学活性,为进一步的体内实验奠定了基础.