子宫颈脱落细胞中DAPK1、 RAR-β和MGMT基因启动子的甲基化水平及其临床意义

目的 检测宫颈脱落细胞中DAPK1、RAR-β、MGMT基因启动子的甲基化水平,探讨其筛查高级别宫颈病变[包括宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ、Ⅲ]及宫颈鳞癌的价值.方法 采用简单随机法选取2010年3-10月间北京协和医院临床使用后剩余的宫颈脱落细胞标本共103份,其中,细胞学诊断包括正常宫颈细胞12份、不典型鳞状上皮细胞(ASC)17份、低度鳞状上皮内病变(LSIL) 30份、高度鳞状上皮内病变( HSIL)30份、宫颈鳞癌14份；组织学诊断包括正常宫颈组织27份、CIN Ⅰ19份、CIN Ⅱ 17份、CIN Ⅲ 25份、宫颈鳞癌15份.采用甲基化特异性高分辨率熔解曲线分析(MS-HRM)法检测宫颈脱落细胞中DAPK1、RAR-β、MGMT基因启动子的甲基化率,并评价MS-HRM法检测的敏感性；采用第二代杂交捕获技术( HCⅡ)检测宫颈脱落细胞中高危型HPV载量(以HPV-HCⅡ值表示)；评价DAPK1、RAR-β、MGMT基因启动子的甲基化和HCⅡ单独或联合检测筛查高级别宫颈病变及宫颈鳞癌的价值.结果MS-HRM法可以检测出标准样本中的1％DNA甲基化率.在不同细胞学病变中,DAPK1、RAR-β、MGMT基因启动子的甲基化率分别比较,差异均有统计学意义(P值分别为0.000、0.011、0.002)；在不同组织学病变中,DAPK1和RAR-β基因启动子的甲基化率分别比较,差异均有统计学意义(P值分别为0.000、0.021).高级别宫颈病变+宫颈鳞癌与正常宫颈+CINI组织中DAPK1基因启动子的甲基化率分别为1.47％和20.98％,两者比较,差异有统计学意义(P =0.000).DAPK1基因启动子的甲基化检测筛查高级别宫颈病变及宫颈鳞癌的灵敏度为0.571、特异度为0.791,曲线下面积(AUC)为0.709；DAPK1基因启动子的甲基化联合HCⅡ检测的灵敏度为0.825、特异度为0.565,AUC为0.695.结论 MS-HRM法检测宫颈脱落细胞的甲基化水平是可行的.DAPK1、RAR-β基因启动子甲基化可以作为筛查宫颈病变的分子标记.DAPK1基因启动子的甲基化联合HCⅡ检测有助于筛查高级别宫颈病变及宫颈鳞癌.