微小RNA-199a对子宫内膜间质细胞黏附、迁移和侵袭能力的调控作用

目的 探讨微小RNA-199a (miR-199a)对子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞黏附、迁移和侵袭能力的调控作用.方法 利用脂质体lipofectamine 2000将成熟miR-199a模拟物(转染组)和阴性对照物(对照组)转染人子宫内膜间质细胞.采用黏附试验检测转染后细胞的体外黏附能力,划痕试验和迁移实验检测转染后细胞的迁移能力,重组细胞基底膜侵袭实验检测细胞的侵袭能力.运用荧光素酶报告基因试验验证核因子κB(NF-κB)抑制蛋白激酶β(IKKβ)是miR-199a的靶基因.应用蛋白印迹法检测IKKβ、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)、磷酸化IκB-α( p-IκB-α)和NF-κB蛋白的表达.结果 (1)细胞黏附能力:转染组细胞的黏附抑制率为(14±4)％,明显高于对照组细胞(0),差异有统计学意义(P＜0.01).(2)细胞迁移和侵袭能力:划痕试验显示,转染组细胞48 h后,划痕愈合程度低于对照组;迁移试验显示,转染组和对照组穿膜细胞数分别为(130 ±31)、(247±36)个/高倍视野(×200),两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);侵袭试验显示,两组穿透基底膜细胞数分别为(63±15)、(133±17)个/高倍镜,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(3)荧光素酶的表达水平:荧光素酶报告基因试验显示,转染组和对照组细胞的荧光素酶表达水平分别为0.160±0.006和0.383±0.083.两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(4)蛋白表达水平:与对照组细胞蛋白表达水平(设定为1.000)比较,转染组细胞中IKKβ、p-IκB-α、IκB-α和NF-κB蛋白的表达水平分别为0.350±0.195、0.443±0.076、1.970±0.486和0.454±0.147,两组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 miR-199a能抑制人子宫内膜间质细胞的黏附、迁移和侵袭能力;IKKβ为miR-199a的靶基因;miR-199a抑制内膜间质细胞侵袭能力的机制之一可能是通过调控靶基因IKKβ,抑制NF-κB通路的活化水平.