高通量检测全基因组DNA甲基化方法的建立

目的:建立焦磷酸测序技术联合甲基化敏感性内切酶高通量定量分析全基因组DNA甲基化水平的方法(PME).方法:以Lambda DNA为标准品,取＞10倍浓度梯度DNA(125、250、500、1000和2000 ng)进行双酶切后焦磷酸测序,检测甲基化程度,分析测序峰值与模板量相关性；以经甲基化酶(M.SssⅠ)处理的Lambda DNA为阳性对照品,与阴性对照品(未经甲基化酶处理的阴性Lambda DNA)混合(混合比例分别为0、25％、50％、75％和100％),进行甲基化程度相关性分析；以该实验方法对8例健康体检者和6例非小细胞肺癌(NSCLC)组织DNA进行分析.结果:测序峰值与模板量呈线性相关,在125～2000 ng,实验重复性良好；阳性对照品甲基化程度为100％,阴性对照品为0,甲基化水平呈线性相关,相关系数为0.999.健康人甲基化水平平均值为0.44664,NSCLC患者为0.489150,差异明显.结论:成功构建了焦磷酸测序技术联合甲基化敏感性内切酶分析全基因组DNA甲基化水平的方法.该方法适合于样本的高通量分析,为临床检测全基因组DNA甲基化状态、肿瘤早期诊断提供了新思路.