Twist基因干扰抑制小鼠视网膜新生血管形成的研究

目的 通过RNA干扰技术抑制小鼠视网膜新生血管形成过程中Twist基因的表达,观察视网膜新生血管内皮细胞的迁移变化和细胞转型规律,寻找抑制视网膜新生血管发生的新靶点.方法 实验研究.取健康C57BL/6J新生小鼠建立高氧诱导小鼠视网膜新生血管动物模型.小鼠生后第12天,分别给予Twist干扰质粒和无关对照质粒玻腔注射治疗.第17天取材,行视网膜Evans蓝灌注铺片、组织病理学检查、新生血管内皮细胞计数和免疫组织化学检测及Real-Time PCR检测.对各组视网膜新生血管内皮细胞计数和Real-Time PCR检测目标基因的表达变化,采用单因素方差分析进行统计学比较.结果 光镜下观察突破内界膜的视网膜新生血管,正常对照组、高氧诱导组、干扰质粒组和对照质粒组突破内界膜的血管内皮细胞平均每眼分别为0.34±0.11、32.73±6.38、4.56±2.02和20.17±6.49.小鼠视网膜Evans蓝灌注铺片观察和石蜡切片HE染色观察显示Twist干扰质粒组小鼠第17天较高氧诱导组视网膜血管迂曲渗漏减轻,新生血管明显减少.Twist干扰质粒组视网膜新生血管内皮细胞计数较高氧诱导组显著减少.免疫组织化学检测可见Twist干扰质粒组小鼠视网膜Twist和波形蛋白表达较高氧诱导组明显减少.使用Real-Time PCR方法检测各组小鼠第17天视网膜Twist基因和波形蛋白基因的表达,Twist干扰质粒组表达较高氧诱导组下调(F=27.214,31.211;P＜0.05).结论 在小鼠视网膜新生血管形成过程中,细胞转型调控的Twist基因发挥重要作用,通过RNA干扰技术抑制Twist基因的表达,可阻遏细胞转型的发生,抑制视网膜新生血管的形成.