表皮生长因子对人眼Müler细胞增生迁移的影响及其作用机制

背景 研究证实表皮生长因子(EGF)可促进鼠视网膜Müller细胞的增生和迁移,但EGF能否促进人眼Müller细胞的增生迁移尚未见报道.目的 探讨人眼Müller细胞能否自身表达和分泌EGF及EGF对Müller细胞增生迁移的影响及其作用机制.方法 同一代人永生株Müller细胞系MIO1MI细胞用高糖DMEM进行培养,利用MTT比色法观察不同质量浓度EGF作用24、48、72 h,不同浓度CoCl2作用12 h和24 h,加入导致Müller细胞半数致死量的CoCl2浓度前2 h加入不同质量浓度EGF的Müller细胞增生情况;Transwell小室观察正常及CoCl2缺氧条件下用不同质量浓度EGF作用24、48、72 h后Müller细胞的迁移情况;采用ELISA法观察Müller细胞表达和分泌EGF的情况;通过Western blot法检测体外不同条件培养下EGF对ERK1/2及Akt信号转导通路的作用.结果 正常培养条件下,不同质量浓度的EGF作用后Müller细胞的吸光度(A570)值的总体比较差异有统计学意义(F=123.765,P=0.000),100 mg/L EGF促Müller细胞增生作用最强,为对照组的1.6倍,10 mg/L EGF促Mliler细胞迁移的作用最强,为对照组的4.5倍.各EGF组Müller细胞的A570值均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).缺氧条件下培养Müller细胞半数致死量的CoCl2浓度为600 nmol/L,提前2 h加入10～100μg/L EGF后,EGF对抗缺氧所致Müller细胞的损伤作用最明显.700 nmol/L CoCl2致Müller细胞损伤80%时其自身低分泌7.8 ng/L EGF.10～100 mg/L EGF作用Müller细胞促增生迁移作用信号最明显,600 nmol/L CoCl2作用Müller细胞24 h后ERK1/2及Akt信号强度减弱,提前2 h加入外源性EGF后,ERK1/2及Akt两条信号通路最明显.结论 EGF能以剂量依赖的方式促进体外培养的Müller细胞增生及迁移.正常培养条件下的Müller细胞自身不表达,缺氧条件下Müller细胞自身可少量分泌EGF.EGF可能通过ERK1/2及Akt信号转导通路介导Müller细胞的增生和迁移,并对CoCl2损伤的Müller细胞发挥保护作用.