泛素特异水解酶22基因RNA干扰真核表达载体的构建及鉴定
Sichuan da xue xue bao. Yi xue ban = Journal of Sichuan University. Medical science edition（2011）
Abstract
目的 构建泛素特异水解酶22基因(USP22)RNA干扰(RNAi)的真核表达载体,并观察其对肝癌细胞株HepG2增殖的影响.方法 根据USP22 mRNA序列,合成两条寡聚DNA片段,退火后克隆入质粒载体pMSCV/Hyg/U6.酶切和测序鉴定重组质粒pMSCV/Hyg/siUSP22.脂质体介导重组质粒转染HepG2细胞,RT-PCR和Western blot检测USP22基因mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测细胞增殖能力.结果 经酶切鉴定筛选出的重组质粒测序结果 与目的 序列完全一致.该重组质粒转染能降低HepG2细胞USP22 mRNA及蛋白质表达,并抑制细胞增殖.结论 成功构建USP22基因RNAi真核表达载体,该载体通过下调USP22基因表达,抑制HepG2细胞的增殖能力,为进一步研究USP22的生物学功能奠定了基础.
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Key words
HepG2 cell line,RNA interference,USP22
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