真核表达载体p4CCL20-ZsGreen1-DR 的构建与鉴定

背景:抗炎药物高通量筛选体系的建立,可为相关药物的研究提供一个理想的技术平台.目的:构建以核因子B 顺式作用元件4×CCL20 基序为增强子,以SV40 为启动子,以ZsGreen1-DR 为报告基因的真核表达载体p4CCL20-ZsGreen1-DR.方法:以PGL2-control 质粒为模板,PCR 扩增目的片段SV40,两侧引入KpnⅠ/BamH Ⅰ酶切位点,克隆至pZsGreen1-DR 质粒的Kpn Ⅰ /BamH Ⅰ酶切位点中,构建成pSV40-ZsGreen1-DR 载体.将4×CCL20 基序双链DNA 克隆到pSV40-ZsGreen1-DR 载体的BglⅡ和EcoRⅠ酶切位点之间,构建p4CCL20-ZsGreen1-DR 重组质粒.结果与结论:经过DNA 测序分析证实p4CCL20-ZsGreen1-DR 重组质粒构建成功.该重组质粒可作为抗炎药物高通量筛选体系的基础.