重组猪羧肽酶原B在大肠杆菌中的表达与复性研究

利用大肠杆菌表达系统,表达猪源羧肽酶原B蛋白包涵体,并对包涵体的体外复性条件进行优化.对猪源羧肽酶原B基因进行没计,优化稀有密码子,并将基因片段插入到pET28a载体中,构建表达质粒pET28a-proCPB,并转化人BL21(DE3)中.通过乳糖诱导表达得到包涵体.通过检测酶的比活力来考查复性液的pH、蛋白终浓度、氧化还原对比例、复性时间、复性温度对复性程度的影响.最终确定的体外稀释复性条件为:复性液成份为100 mmol/L Gly-NaOH、pH=9.5、GSH与GSSG的比例为1:0.8(GSH为1 mmol/L)、蛋白终浓度为200μg/ml、复性温度为25℃、复性时间24 h.通过检测,复性液中酶的比活力为11.7 u/mg,经过DEAE纯化后酶的比活力可达到73 u/mg.