抗CD25人鼠嵌合抗体基因真核表达质粒的构建与瞬时表达

目的 构建抗CD25人鼠嵌合抗体基因真核表达质粒,并在293T细胞中进行瞬时表达.方法 采用RT-PCR技术,设计针对信号肽的简并引物,钓取抗CD25杂交瘤细胞的重、轻链可变区基因,以质粒PAG4622为模板,钓取人抗体IgG1重、轻链恒定区基因,分别将重、轻链可变区基因与相应的恒定区基因进行拼接,将完整的重、轻链嵌合基因分别与真核表达载体pOptiVEC和PcDNA3.3连接,构建抗CD25人鼠嵌合抗体基因真核表达质粒,将其通过脂质体法共转染至293T细胞中进行表达.通过RT-PCR法检测嵌合抗体基因的转录水平,ELISA法检测嵌合抗体的表达最,流式细胞术(FCM)分析嵌合抗体的结合活性.结果 抗CD25人鼠嵌合抗体基因真核表达质粒构建正确;RT-PCR显示嵌合抗体基因在293T细胞中成功转录;转染后48、72、96和120 h,细胞培养上清中嵌合抗体的含量分别为7.47、11.72、8.02和18.28 ng/ml;FCM检测其能特异性与IL-2Rα链结合.结论 已成功构建了抗CD25人鼠嵌合抗体基因的真核表达质粒,并能在293T细胞中瞬时表达.