无血清微载体培养Vero细胞和H1N1流感病毒条件的优化

目的 优化无血清微载体培养Vero细胞和H1N1流感病毒的条件,为Vero细胞流感疫苗的开发奠定基础.方法 在搅拌瓶中采用不同的细胞接种量和不同的微载体浓度培养Vero细胞,制备流感病毒,并检测不同的pH值、TPCK-胰酶含量、病毒接种量及病毒收获时间对流感病毒血凝滴度的影响.结果 以(1.0～5.0)×105个/ml的Vero细胞接种至浓度为3 mg/ml的无血清微载体中,病毒培养液pH值为7.2～7.4,TPCK-胰酶含量为1.0μg/ml,病毒接种量为1.0 MOI,并在感染48 h后补加TPCK-胰酶,培养72 h后收获上清与细胞内病毒,血凝滴度可达1∶512.结论 已获得了无血清微载体培养Vero细胞和H1N1流感病毒的适宜条件,为应用生物反应器大规模制备流感病毒奠定了基础.