D2蛋白酶间接ELISA检测方法的建立

目的 建立D2蛋白酶间接ELISA检测方法,为D2蛋白酶的进一步研究及应用奠定基础.方法 以纯化的D2蛋白酶为抗原,免疫新西兰白兔,制备D2蛋白酶多克隆抗体,建立D2蛋白酶间接ELISA检测方法,并进行验证及初步应用.结果 D2蛋白酶间接ELISA检测方法的最佳反应条件为:一抗稀释度为1:64 000,二抗稀释度为1:80 000,抗原稀释度为1:100,饱和包被浓度为1 160 ng/ml,封闭剂为10%胎牛血清.标准曲线的线性检测范围为18～1 160 ng/ml.该方法准确性、重复性良好,特异性强、敏感性高,与琼脂扩散试验检测结果的符合率为95.5%.结论 已建立了D2蛋白酶间接ELISA检测方法,可用于D2蛋白酶含量的检测.