褪黑素对阿霉素抗ER~+乳腺癌细胞MCF-7作用的影响及其机制

目的:探讨生理浓度(10~(-9)mol/L)褪黑素和药理浓度(10~(-5)mol/L)褪黑素对阿霉素抑制ER~+乳腺癌细胞MCF-7作用影响及其机制.方法:1)应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测经不同浓度褪黑素孵育后阿霉素对MCF-7的抑制率和IC_(50)变化.2)应用流式细胞学方法观察不同浓度褪黑素、阿霉素以及两药联用时对MCF-7凋亡的影响.3)应用Western blotting法检测不同浓度褪黑素、阿霉素单药和两药联用对MCF-7细胞p53和bcl-2蛋白表达的影响.结果:1)阿霉素对MCF-7乳腺癌细胞具有明显的抑制作用,且成剂量时间依赖性.IC_(50)值为0.62±0.07μg/ml,经生理浓度和药理浓度褪黑素孵育后IC_(50)值分别降为0.59±0.09μg/ml和0.42±0.02μg/ml,前者与孵育前相比未见统计学差异(P>0.05),后者相比差异显著(P<0.01).2)流式细胞学检测结果显示:阿霉素对MCF-7细胞具有凋亡促进作用,随浓度增高凋亡率未见增加(P>0.05).生理浓度褪黑素联合阿霉素与相应浓度的阿霉素单药相比,凋亡率未见明显增加(P>0.05).药理浓度褪黑素联合阿霉素与相应浓度阿霉素单药比较,凋亡率明显增加(P<0.05),联合组随着阿霉素浓度增加凋亡率并未见明显变化(P>0.05).3)MCF-7乳腺癌细胞株中呈p53蛋白低表达、bcl-2蛋白高表达.生理浓度褪黑素即可显著增高MCF-7细胞p53蛋白并降低bcl-2蛋白表达,并有剂量依赖性(P<0.01).药理浓度褪黑素联合不同浓度阿霉素对两个蛋白表达未见显著性差异(P>0.05);阿霉素对两种蛋白表达未见明显影响(P>0.05).结论:1)生理浓度褪黑素(10~(-9)mol/L)对阿霉素的抗癌作用未见明显影响,药理浓度(10~(-5)mol/L)以上褪黑素表现出对阿霉素明显的增敏作用.2)阿霉素较低浓度时,凋亡促进作用可能是褪黑素对其增敏机制的一部分,随着阿霉素浓度的提高,褪黑素的细胞毒增敏机制可能占主要地位.3)生理浓度褪黑素能提高ER~+乳腺癌细胞p53蛋白表达并降低bcl-2蛋白表达,并具有剂量依赖性.涉及p53和bcl-2的凋亡通路可能是褪黑素对阿霉素增敏机制的一部分.