高糖对人类肾小球系膜细胞PKC及MMPs/TIMPs的影响

目的:研究体外高糖环境下人类肾小球系膜细胞(NHMC)中PKC激活或使用PKC抑制剂干预后 MMP2,9/TIMP1,2的表达,探讨PKC与MMPs/TIMPs信号转导在糖尿病肾病发生发展中的作用.方法:将NHMC分4组: N组(对照组,5 mmol/L葡萄糖);H组(高糖组,30 mmol/L葡萄糖);P组(抑制剂组,30 mmol/L葡萄糖+10-5mol/L白屈菜红碱);M组(甘露醇组,5 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇).分别于上述4种不同成分培养基中进行细胞培养,第24,48,72 h用MTT法测定NHMC增殖;并于培养后第24,48 h收集细胞,抽提mRNA及蛋白质,用ELISA方法测定胞膜、胞核蛋白质PKC活性.用RT-PCR和Western 印迹方法检测MMP2,9, TIMP1,2 mRNA和蛋白质的表达.结果:高糖组细胞膜和胞核部分的PKC活性较对照组明显升高(P＜0.01), MMP2,9, TIMP1,2 mRNA及蛋白质的表达较对照组明显上升(P＜0.01);而MMP-9/TIMP-1, MMP-2/TIMP-2比值较对照组明显下降(P＜0.05). 高糖加PKC抑制剂白屈菜红碱后,MMP2,9, TIMP1 mRNA及蛋白质表达较对照组明显升高 (P＜0.01),但MMP9/TIMP1, MMP2/TIMP2比值较高糖组明显升高(分别P＜0.05,P<0.01).PKC活性与MMP-2/TIMP-2及MMP-9/TIMP-1的蛋白质比值均呈负相关(分别r=-0.651,r=-0.702,均P＜0.05).结论:高糖可刺激人类肾小球系膜细胞PKC活化,在DN中PKC活化与MMP2,9/TIMP1,2的表达水平有密切关系.