兔脂肪干细胞的体外分离培养特性

背景:现有国内外文献报道的脂肪干细胞分离、培养方法并不完全一致,所应用的消化酶、消化方法、培养基等均存在差异.目的:观察体外分离培养的兔脂肪干细胞生物学特性.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-04/2008-03在昆明医学院生物医学中心干细胞所完成.材料:健康成年新西兰大白兔6只,由昆明医学院实验动物中心提供.Ⅰ型胶原酶为美国Gibco公司产品,胰蛋白酶为美国Sigma公司产品.方法:无菌切取兔腹股沟皮下脂肪垫,采用Ⅰ型胶原酶搅拌消化法分离培养原代脂肪干细胞,待细胞生长至80%融合时传代.主要观察指标:倒置显微镜和苏木精-伊红染色观察细胞形态及生长情况,免疫荧光细胞化学染色检测细胞表面抗原的表达,MTT比色法绘制细胞牛长曲线,流式细胞仪测定细胞增殖指数.结果:自兔皮下脂肪分离培养获得的脂肪干细胞增殖迅速,低密度生长时呈三角形或短梭形,核/浆比例较大,接近融合时呈成纤维细胞样外观,长期传代形态无明显改变.第3代脂肪干细胞表面抗原CD44呈阳性表达,CD34为阴性;细胞生长曲线呈"S"形,在对数生长期其细胞倍增时间为59 h.随传代次数的增加,来自同一供体的兔源性脂肪干细胞增殖指数逐渐升高,至第8代达到最高,以后逐渐降低.结论:兔皮下脂肪组织中含有丰富的间充质干细胞,兔源性脂肪十细胞体外以成纤维细胞样形态贴壁生长,表达CD44表面标志物,具有较强的体外增殖能力.