趋化因子CXCL-8趋化骨髓间充质干细胞迁移的体外效应

背景:早期研究表明趋化因子参与骨髓间充质干细胞的体外趋化,确定骨髓间充质干细胞体内迁移的分子机制,对其介导的细胞治疗中枢神经系统损伤和疾病有重要作用.目的:观察体外条件下趋化因子CXCL-8对大鼠骨髓间充质干细胞迁移的趋化作用.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-10/2008-06在青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所完成.材料:纯种SPF级成年Wistar大鼠8只,由青岛市实验动物和动物实验中心提供.鼠重组趋化因子CXCL-8为Santa cruz 公司产品.方法:采用全骨髓法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,胰蛋白酶消化传代.取500μL趋化因子CXCL-8,加入含体积分数为0.5%胎牛血清的DMEM条件培养基,分别将质量浓度调整为5,50,250,500μg/L加到趋化板下层,对照组单纯添加DMEM条件培养基,以8μm孔径的聚碳酸酯膜覆盖.调整骨髓间充质干细胞浓度至1.5×109L-1,取100μL细胞悬液加到趋化板上层.为验证趋化因子CXCL-8作用的特异性,将经抗CXCR6多克隆抗体孵育12 h后的骨髓间充质干细胞加到趋化板上层,趋化因子CXCL-8加到趋化板下层.主要观察指标:骨髓间充质干细胞趋化因子受体CXCR1的表达,趋化因子CXCL-8对骨髓间充质干细胞体外趋化迁移作用及其特异性检测.结果:骨髓间充质干细胞趋化因子受体CXCRl呈阳性表达,位于细胞膜和细胞浆中,RT-PCR琼脂糖凝胶电泳后出现215 bp特异性扩增条带.与对照组比较,加入5～500 μg/L趋化因子CXCL-8后,骨髓间充质干细胞迁移数均明显增加(P＜0.05).加入抗CXCR1多克隆抗体后,骨髓间充质干细胞迁移数较250μg/L趋化因子CXCL-8组明显减少(P＜0.05).结论:体外条件下趋化因子CXCL-8在5～500μg/L质量浓度范围可趋化骨髓间充质干细胞迁移,封闭趋化因子受体CXCR1后其趋化迁移作用明显减弱.