阳离子脂质体转染Hela细胞的实验冰

背景;基因载体是基因治疗中重要的影响因素,阳离子脂质体细胞毒性低,转染效率高,是一种很有前景的基因转染载体.目的:评价两种阳离子脂质体介导基因转染宫颈癌细胞的转染效果,优化它们对宫颈癌细胞的转染条件.设计、时间及地点:以Hela细胞为观察对象,分组设计.实验于2008-03/06在大连民族学院生命科学学院国家民委一教育部重点实验室完成.材料:质粒pGFP.N2购自Clontech公司,Hela细胞由大连民族学院的实验室保存.方法;.首先采用DNA延滞实验考察阳离子脂质体与DNA的结合能力,然后用进行细胞转染实验研究脂质体的转染效率,最后通过四甲基偶氮唑盐法考察脂质体对细胞的毒性.主要观察指标:采用DNA延滞实验观察阳离子脂质体Lipofectamine 2000和DOTAP与DNA的结合能力,以报告基因(绿色荧光蛋白基因pGFP-N2),分析阳离子脂质体Lipofectamine 2000和DOTAP转染Hela细胞转染效率和细胞毒性.结果:Lipofectamine 2000和DOTAP与DNA均有很强的结合力:以绿色荧光蛋白基因为报告基因,Lipofectamine 200C转染率较高;当Lipofectamine 2000与DNA质量比为3:1时,转染效率最高,约72%,是DOTAP转染细胞最高活性的2.5倍;在最佳转染剂量时,2种试剂的细胞存活率均在75%以上,Lipofectamine 2000的毒性相对较小.结论:对Hela细胞而言,Lipofectamine 2000较DOTAP具有更高的转染效率和较低的细胞毒性.