曲伏前列腺素对体外培养人眼睫状肌细胞基质金属蛋白酶2的作用

背景:曲伏前列腺素可通过增加眼睫状肌细胞间间隙,使葡萄膜巩膜房水流出通道流出阻力下降,进而降低眼压,这一作用途径是否通过增强睫状肌基质金属蛋白酶的表达而完成?目的:观察曲伏前列腺素干预人眼睫状肌细胞基质金属蛋白酶2表达活性的作用.设计:观察对比分析.单位:中山大学附属第二医院眼科.材料:实验于2005-08/2006-04在中山大学附属眼科中心完成.供体摘自1例死亡1 h内无眼疾青年尸体单侧眼球(均经其家属同意),取自中山眼科医院,供体排除眼部疾患.兔抗人基质金属蛋白酶2多克隆抗体(武汉博士德生物工程有限公司),曲伏前列腺素(美国ALCON公司,批号:86610F,0.004%溶液).方法:实验干预:在人睫状肌细胞无牛血清培养基中加入 1 μmol/L曲伏前列腺素为实验组,同时以无药物干预的细胞为对照组,实验组于加药后6,12,24 h收集细胞进行观察.实验评估:采用RT-PCR和ELISA法分别检测各组人睫状肌细胞基质金属蛋白酶2在基因和蛋白水平的表达;采用Zymography技术分別检测各组细胞基质金属蛋白酶2的活性.主要观察指标:人眼睫状体细胞内基质金属蛋白酶2 mRNA的表达,细胞外液基质金属蛋白酶2蛋白表达以及基质金属蛋白酶2活性.结果:①基质金属蛋白酶2 mRNA的表达:实验组加药后6,12,24 h基质金属蛋白酶2 mRNA相对表达量呈逐渐升高趋势(F=236.959,P＜0.01).②基质金屑蛋白酶2蛋白表达:实验组加药后6,12,24h基质金属蛋白酶2表达随曲伏前列腺素作用时间延长逐渐升高(F=38.110,P＜0.01).③基质金属蛋白酶2活性:Zymography技术检测实验组加药后6,12,24 h基质金属蛋白酶2活性随曲伏前列腺素作用时间延长而逐渐增强(F=74.348,P＜0.01).结论:体外培养的人睫状肌细胞接受曲伏前列腺素作用后,基质金属蛋白酶2表达随药物作用时间延长逐渐增加,活性逐渐增强.