汉滩病毒M片段噬菌体表位文库的构建及筛选

目的 通过构建汉滩病毒M片段的噬菌体展示文库,筛选汉滩病毒包膜蛋白的抗原表位.方法 DNase Ⅰ随机消化的M片段与载体pComb3连接,转化宿主XL-1Blue,在辅助噬菌体VCSM13存在的条件下,获得M片段的随机噬菌体文库.利用纯化的恢复期病人血清对M片段噬菌体文库进行3轮淘洗,通过ELISA、序列分析对所获得的克隆进行鉴定.并对其中2个阳性克隆的目的 片段进行了原核表达和免疫原性分析.结果 筛选获得的5个阳性噬菌体克隆均位于G1蛋白编码区,原核表达的2个阳性克隆片段蛋白免疫兔,免疫兔血清能与病毒抗原发生特异反应.结论 本技术路线可用于汉滩病毒包膜蛋白抗原表位的研究,为汉滩病毒诊断试剂的研制、亚单位疫苗的设计提供了数据.