健心方对核因子-κB活性的影响

目的:观察脂多糖对CHO-K1细胞核因子-κB活性的影响及健心方含药血清对脂多糖刺激的调节作用.方法:①实验于2005-03/05在解放军广州军区武汉总医院实验中心和南方医科大学附属南方医院肿瘤中心实验室完成.选用清洁级SD大鼠12只.随机将鼠分为2组:动物治疗组和动物对照组,每组6只.②动物治疗组给予3.2 kg/L健心方口服液(水煎醇提法制备,主要成分:黄芪、太子参、川芎、当归、葶苈子、云苓、桂枝、香附等),动物对照组用等量生理盐水以获得空白对照血清.灌胃体积均为10mL/kg.1 d剂量分2次服,连续给药3 d,第4天1次服用全天剂量后采血制备含药血清和空白对照血清.③体外培养CHO-K1细胞,分为6组:对照组:转染质粒(pNF-κB-TA-Luc和pCMV-β-半乳糖苷酶共0.5 μg)后加用脂多糖刺激;感染1组:转染质粒并加含Toll样受体4全长的重组腺病毒感染;刺激1组:转染质粒并加含Toll样受体4全长的重组腺病毒感染后用脂多糖刺激;治疗组:转染质粒、加含Toll样受体4全长的重组腺病毒感染并用脂多糖刺激后加用含药血清干预;感染2组:转染质粒并加含Toll样受体4细胞外段的重组腺病毒感染;刺激2组:转染质粒并加含Toll样受体4细胞外段的重组腺病毒感染后用脂多糖刺激.④检测各组细胞核因子-κB相对活性,即相对发光值(荧光素酶强度值/β-半乳糖苷酶值).③数据作完全随机设计方差分析,组间比较用LSD检验和Dunnett(双侧)检验.结果:大鼠12只均进入结果分析.荧光素酶报告基因检测结果表明,相对发光值:对照组细胞明显高于感染1组(3 560±57,1 634±38,P<0.05);刺激1组细胞明显高于对照组、感染1组(8767±82,P<0.05,0.01);感染2组、刺激2组细胞明显低于对照组(530±74,536±71,P<0.05);治疗组明显低于刺激1组(1 820±24,P<0.05),但明显高于刺激2组(P<0.05),略低于转染后对照组,但差异不明显(P>0.05).结论:健心方含药血清可部分拮抗脂多糖导致的核因子-κB激活作用;Toll样受体4是脂多糖激活细胞的关键受体,健心方含药血清的拮抗作用可能是通过阻断了Toll样受体4对脂多糖的识别造成的.