正常人结膜杯状细胞的体外培养

目的体外建立人结膜杯状细胞系,观察其形态结构等生物学特征,并观察杯状细胞超微结构.设计实验性研究.研究对象体外培养的人结膜杯状细胞.方法外眼手术中取正常球结膜组织,放入含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中,以组织块培养法进行培养.通过倒置相差显微镜下细胞形态、特殊组化染色和免疫组化方法鉴定杯状细胞.利用透射电镜观察其超微结构.主要指标细胞形态、结构.结果培养24小时后细胞从组织块向外长出,6～10天后可形成细胞单层,并可传3～5代.倒置相差显微镜下可见杯状细胞呈长椭圆形,胞浆中含有黏蛋白颗粒.对阿利新蓝/过碘酸-希夫试剂染色(AB-PAS染色)呈阳性;对杯状细胞特异性中间丝角蛋白-7(CK-7)和黏蛋白MUC5AC单克隆抗体均呈阳性反应,而对复层非角化上皮细胞特异性中间丝角蛋白-13(CK-13)呈阴性反应.透射电镜下可见离体杯状细胞体积较大,呈长椭圆形,核位于细胞一端,胞浆中充满圆形黏蛋白颗粒,大小不一.传三代后杯状细胞纯度可达80%左右.结论人结膜杯状细胞可在体外培养并传代,并保持在体细胞特性,为进一步研究杯状细胞相关的眼表疾病提供实验室基础.