应用人延伸因子1α亚基启动子和人工转录激活因子提高外源基因在CHO细胞中的表达

表达载体的设计对于提高外源基因在哺乳动物细胞中的表达量十分重要.而表达载体中最为重要的元件是启动子.一些常用病毒来源的启动子,如巨细胞病毒即早期启动子(PCMV-IE)仅在S期激活,应用这类启动子表达外源蛋白需要宿主细胞不停增殖,这对于连续持久大规模培养的宿主细胞不现实.而人延伸因子lα亚基启动子(PEF-1α)不受细胞周期限制,且启动子强度高于PCMV-IE,对于大规模外源蛋白的生产较为理想.首先构建子基于 PEF-1α启动子的哺乳动物细胞表达载体pED5,在增殖缓慢的CHO细胞中,此载体表达外源蛋白的能力是应用PCMV-IE启动子表达载体的4.1倍.由于启动子一般仅能决定基因转录的本底水平.而转录激活因子(transeription activtors)对基因转录的影响更大,所以另把两个人工转录激活结构域AH和VP2接到λ噬菌体cⅠ蛋白的C端,它们通过cⅠ蛋白结合于已插入到PEF-1α启动子的TATA框上游约200 bp的λ噬菌体OR2～OR1序列l,而被"征募"到PEF-1α启动子TATA框附近,从而促进基因的转录.把上述元件均整合进一个表达载体中,构建了两个新型表达载体pER～AH和pER-VP2.pER-AH表达外源蛋白的能力比不含转录激活因子的表达载体略高,而pER-VP2表达外源蛋白的能力则比不含转录激活因子的表达载体高2.7倍.