PRGDWR-尿激酶原双功能嵌合分子的性质研究

为赋予单链尿激酶型纤溶酶原激活剂(single chain urokinase-type plasminogen activator, scu-PA, 尿激酶原)以抗血小板聚集的功能，在scu-PA的kringle区118 位Gly与119位Leu之间插入PRGDWR序列（insert mutant B，InB）.利用甲醇酵母（ Pichia pastoris）进行分泌表达，经金属离子螯合亲和层析与S强阳离子交换层析，得 到纯蛋白.实验测定InB对人工合成底物S-2444的酰胺解活性为5 900 IU/mg，动力学常数为 ：KInBm,S-2444=56.8 μmol*L-1，kInBca t, S-2444=0.33 s-1；水解天然底物plasminogen的动力学常数为：KInB m,plg=0.397 μmol*L-1，kInBcat,plg=0.0164 s-1 .InB激活plasminogen的反应在有fibrin存在条件下InB的活性为无fibrin条件下的46.3 ％.该突变体在体外激活plasminogen的活性与同一系统表达的野生型scu-PA基本相同.该突 变体表现出较强的抗血小板聚集活性，IC50＝12.7 μmol*L-1，而野 生型scu-PA无此功能.实验表明scu-PA的K区插入突变体InB是一种极具潜力的双功能溶栓 分子.