中国钩端螺旋体强毒株017膜蛋白基因的质粒载体构建及表达

目的 构建表达我国钩体强毒赖型017株外膜蛋白的重组质粒.方法 用PCR方法扩增并回收017株钩体外膜蛋白基因片段OmpL1,将其与质粒pBK-CMV重组,通过菌落颜色和酶谱分析筛选出重组质粒.然后从该重组质粒切下OmpL1基因片段,重新克隆至质粒pBV220中,酶谱分析和DNA杂交鉴定出正向重组质粒.将含有正向重组质粒的宿主菌诱导表达生长后,提取全菌总蛋白进行SDS-PAGE分析.结果 筛选出4个与pBV220正向重组的质粒,其中一株带重组质粒pBLM1的菌株表达了一相对分子质量为33.5×103的新蛋白.结论 重组质粒pBLM1的构建和表达成功说明扩增得的OmpL1基因具有完整的阅读框架,并使简便获得大量天然的017株钩体OmpL1蛋白成为可能,为新型钩体疫苗的研究奠定了基础.