恶性疟原虫Pfs25蛋白在毕赤酵母中高效分泌表达策略的研究

目的:探索Pfs25蛋白在毕赤酵母中高效分泌表达策略,提高Pfs25蛋白的表达量.方法:本研究主要通过4个方面深入研究Pfs25蛋白的高效表达策略.①构建Pfs25蛋白的诱导型表达重组株pPICZαA-Pfs25/GS115和组成型表达重组株pGAPZα A-Pfs25/GS 115,并比较两酵母菌株的表达量差异.②从培养基、pH值、表达时间等方面入手,分别对诱导型和组成型分泌表达条件进行研究,寻找适合Pfs25蛋白表达的最佳条件.③利用pAO815表达载体构建Pfs25多拷贝重组酵母菌株pAO815-(α-Pfs25) n/GS115,通过提高pfs25基因拷贝数来提高表达量.④将毕赤酵母中蛋白二硫键异构酶(PDI)基因引入Pfs25重组酵母中,以提高Pfs25蛋白的分泌表达.结果:本研究成功构建了Pfs25诱导型和组成型表达重组酵母菌株,实现了Pfs25的诱导型和组成型表达,组成型表达量略高于诱导型.并通过对各种表达条件的比较研究,找到了适合Pfs25蛋白在毕赤酵母中高效分泌表达的条件.结论:通过对Pfs25蛋白高效表达策略的研究,显著提高了Pfs25蛋白在毕赤酵母中的分泌表达水平,使其表达量提高了约5倍.