Lg-1诱导人胃癌细胞系BGC-823凋亡作用及机制的探讨

目的:研究新鬼臼毒素衍生物4β-4-脱氧-氮取代的异亮氨酸(5-FU基)-戊醇酯-4’-去甲表鬼臼(Lg-1)对人胃癌细胞系BGC-823的诱导凋亡作用及机制.方法:噻唑蓝(MTT)、流式细胞术和Hoechs33258染色分别检测Lg-1对BGC-823细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测药物处理后对BGC-823细胞凋亡相关基因p53、Bax、Bcl-2、p21和Caspase-3表达的影响.结果:Lg-1对BGC-823细胞增殖具有明显剂量和时间依赖的抑制作用,随药物浓度增加,抑制效应增强,药物浓度为0.01、0.1、1和10 μmol/L时,Lg-1对BGC-823的抑制率分别为23.5％、30.8％、32.4％和52.1％,与依托泊苷(Vp-16)处理组(3.5％、8.7％、10.9％和21.3％)比较差异有统计学意义,P均＜0.01.随时间延长,抑制作用逐渐增强,12～60 h Lg-1处理组对BGC-823的抑制率与Vp-16处理组比较差异有统计学意义,12 h抑制率分别为9.8％和8.0％,P=0.001;24h分别为11.6％和9.0％,P=0.02;36h分别为19.4％和16.2％,P=0.014;48 h分别为44.1％和41.2％,P=0.048;60 h分别为65.4％和50.1％,P=0.001.细胞周期检测显示,Lg-1作用12和24 h后,G2/M期的细胞含量分别为39.37％和74.36％,与对照组及Vp-16组比较均明显增加,而G0/G1期细胞含量分别为20.06％和12.25％,较对照组及Vp-16组显著减少.Hoechst33258染色显示,Lg-1处理组细胞核固缩、碎裂、凋亡样改变,药物处理后Bcl-2 mRNA的表达呈降低趋势,Vp-16处理组Bcl-2 mRNA表达量为0.748,Lg-1处理组为0.425,而p53、Bax、p21和Caspase-3 mRNA的表达呈增高趋势,Vp-16处理组mRNA表达量分别为1.074、1.232、1.818和2.9,Lg-1处理组分别为1.903、1.393、1.911和3.097,且Lg-1处理组作用优于Vp-16处理组.结论:Lg-1可抑制胃癌细胞增殖,使细胞阻滞在G2/M期,该过程可能与其上调p53、Bax、p21、Caspase-3表达和下调Bcl-2基因的表达有关.