癌胚抗原启动子驱动双自杀基因对裸鼠大肠癌移植瘤的作用

目的 探讨癌胚抗原启动子(Cp)驱动的双自杀基因系统Cp-CDglyTK对裸鼠大肠癌移植瘤的治疗作用.方法 pcDNA3.1(-)Cp-CDglyTK质粒转染癌胚抗原阳性的SW480细胞和癌胚抗原阴性的HeLa细胞,反转录PCR检测目的基因的表达；给予不同浓度的前体药物5氟胞嘧啶(5-FC)及更昔洛韦(GCV)处理,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法评估杀伤效应和旁观者效应.96只裸鼠在右侧腋窝皮下移植SW480细胞,72只移植HeLa细胞,建立大肠癌移植瘤模型.前体药物治疗实验中,取SW480和HeLa移植瘤裸鼠各48只,各分4组(Ⅰ～Ⅳ,Ⅴ～Ⅷ组,n=12),分别瘤体注射磷酸盐缓冲液(PBS)、GCV联合5-FC,腹腔注射PBS、GCV联合5-FC.自杀基因联合前体药物治疗实验中,余下48只SW480移植瘤裸鼠分为Ⅸ～Ⅻ组(n=12),24只HeLa移植瘤裸鼠分为ⅩⅢ～ⅩⅣ组(n=12),均经瘤体注射脂质体Lipofectamine(R)和质粒Cp-CDglyTK,再由腹腔注射药物(Ⅸ组:PBS,Ⅹ组GCV,Ⅺ组:5-FC,Ⅻ组:GCV联合5-FC,Ⅻ组:PBS,ⅩⅣ组:GCV联合5-FC).记录肿瘤体积、最终肿瘤重量和生存时间,比较分析各组裸鼠的治疗效果.结果 转染质粒的SW480细胞有CDglyTK基因的表达,GCV联合5-FC对转染质粒的SW480细胞的抑制率(59.87％±0.21％)明显高于HeLa细胞(9.90％±0.09％,P＜0.01),GCV与5-FC联合用药对转染质粒的SW480细胞的生长抑制率和旁观者效应大于单一使用GCV或5-FC(均P＜0.05).Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅷ组分别与对照组Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅶ组比较,肿瘤体积、最终瘤重和生存期差异均无统计学意义(均P ＞0.05).Ⅻ组最终肿瘤体积和最终瘤重均小于Ⅸ组、Ⅹ组和Ⅺ组[(150.0±3.2)比(522.5±1.9)、(256.8±10.4)和(260.7±2.2)mm3,(54.1±10.4)比(682.0±12.0)、(251.8±15.1)和(271.6±17.7) mg,均P＜0.05]；Ⅻ组的肿瘤生长抑制率和生存时间大于Ⅹ组和Ⅺ组[92.1％比63.1％、60.2％,(25.7±0.8)比(21.8±0.5)、(18.0±0.9)d,均P＜0.05].ⅩⅣ和ⅩⅢ组肿瘤体积、最终瘤重和生存时间差异均无统计学意义(均P＞0.05),ⅩⅣ组的肿瘤生长抑制率仅为0.9％.结论 Cp-CDglyTK在荷瘤裸鼠体内通过脂质体的介导,能靶向作用于癌胚抗原阳性的大肠癌细胞,并通过前体药物显著抑制裸鼠大肠癌移植瘤.