构建真核表达载体实现恶性疟原虫膜蛋白pfs25在CHO细胞中的重组表达

构建一种可实现外源基因高效的、适用于中华仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞的质粒表达系统,并成功实现了恶性疟原虫膜蛋白pfs25基因在CHO细胞中的表达.新构建的真核表达载体是在pBudCE4.1质粒载体上改造获得的,被命名为pCMV-WD,包含了人工合成的、完整的弱化SV40启动子与二氢叶酸还原酶(DHFR)基因组成的顺式表达元件和全新设计的多克隆位点,该载体属于CHO细胞通用载体,理论上可以实现任何外源基因在CHO细胞中的表达.基于该载体,采用定向克隆策略插入了恶性疟原虫膜蛋白pfs25基因,构建的重组表达质粒为pfs25/pCMV-WD.经zeocin抗生素和撤除H、T(次黄嘌呤、胸腺嘧啶脱氧核苷)双筛选,获得了DHFR+基因阳性的细胞克隆.对表达量最高的克隆株进行亚克隆,并经MTX加压筛选以获得高表达pfs25蛋白的CHO细胞株.ELISA和Western Blot结果表明,重组pfs25蛋白具有良好的免疫学反应性,且表达量为0.1 mg/mL.该研究首次获得了可分泌重组pfs25蛋白的CHO细胞株.